Questions fréquentes sur le Programme OMS d’évaluation externe de la qualité des tests d’amplification des acides nucléiques pour le diagnostic du paludisme (programme «NAAT EQA»)
1. Qu’est-ce que le programme NAAT EQA de l’OMS pour le paludisme ?
Le programme NAAT EQA de l’OMS pour le paludisme a pour objectif d’offrir aux laboratoires cliniques, de référence et de recherche un moyen indépendant et périodique de vérifier la qualité de leurs méthodes de diagnostic du paludisme fondées sur l’amplification des acides nucléiques et de suivre leurs performances dans le temps. À cette fin, les laboratoires participants reçoivent des panels d’échantillons bien caractérisés dont la qualité est contrôlée, contenant un mélange non divulgué d'échantillons positifs et négatifs pour Plasmodium. Les participants reçoivent ensuite un rapport d’évaluation externe de la qualité après l’envoi de leurs résultats d’analyse. La participation à ce programme est volontaire et les résultats sont confidentiels.
Le programme NAAT EQA de l’OMS pour le paludisme est coordonné par le Programme mondial de lutte antipaludique de l’OMS et la distribution est assurée par le Service national d’évaluation externe de la qualité du Royaume-Uni (UK NEQAS), la priorité étant donnée aux laboratoires à but non lucratif basés dans les pays en développement. À ce jour, la participation est gratuite.
Le programme permettra aux laboratoires d’obtenir une évaluation indépendante de leurs méthodes de diagnostic fondées sur l’amplification des acides nucléiques afin de déterminer si celles-ci répondent au niveau de qualité minimal requis. Si un laboratoire ne remplit pas cette condition, une assistance technique à distance sera proposée. Le laboratoire pourra entreprendre d’identifier et de corriger les sources d'erreur afin d’améliorer la qualité et la fiabilité de ses méthodes.
2. Qui peut participer au programme NAAT EQA de l’OMS ?
Tous les laboratoires qui utilisent des méthodes fondées sur l’amplification des acides nucléiques, notamment les techniques de PCR nichée, RT-PCR, LAMP ou NASBA, pour la détection des parasites palustres sont habilités à s’inscrire au programme NAAT EQA de l’OMS. Cependant, étant donné que ce programme ne bénéficie actuellement que d’un financement limité, la priorité est donnée aux laboratoires à but non lucratif basés dans les pays en développement, selon le principe du premier arrivé, premier servi. L’objectif est d’obtenir une sélection équilibrée de laboratoires en fonction de l’indication pour les tests, à savoir recherche, surveillance/enquête et géographie. Les laboratoires qui souhaitent participer peuvent envoyer un courrier électronique à MalNAATEQA@who.int. En outre, des appels à participation sont envoyés aux laboratoires potentiellement intéressés, et l'inscription est terminée lorsque des réponses favorables sont reçues et que les lettres d'accord entre l'OMS et les laboratoires participants sont signées.
En plus du programme NAAT EQA gratuit coordonné par l’OMS, UK NEQAS gère son propre programme pour la détection moléculaire du paludisme, soumis à des frais de participation. Les laboratoires peuvent participer soit au programme de l'OMS, soit à celui de UK NEQAS, mais pas aux deux en même temps.
3. Quelle est la fréquence de distribution des panels ?
Le programme NAAT EQA de l’OMS fournit des panels d’évaluation externe de la qualité deux fois par an, habituellement fin janvier et fin juillet. Les dates exactes dépendent des aspects pratiques liés à l’organisation du programme, à savoir la disponibilité des panels et les capacités de UK NEQAS. Les dates sont confirmées par courrier électronique lorsque les appels à participation sont envoyés, en général environ 4 à 8 semaines avant chaque distribution des panels.
4. Qui organise le programme NAAT EQA de l’OMS ?
Le programme NAAT EQA de l’OMS pour le paludisme est coordonné par l’OMS en collaboration avec Public Health England (PHE) par l’intermédiaire de UK NEQAS, avec le soutien de la Fondation des outils diagnostiques nouveaux et novateurs (FIND). L'OMS est responsable de la coordination et de la promotion globales du programme, tandis que UK NEQAS gère le dépôt central des matériels d’évaluation externe de la qualité et dirige les opérations du programme. Cela comprend la préparation, la caractérisation, le stockage et l'expédition des panels, la publication des rapports d’évaluation externe de la qualité envoyés aux laboratoires qui participent et le traitement des requêtes logistiques. Les panels d’évaluation externe de la qualité sont soumis à des tests indépendants effectués par des laboratoires d’arbitrage avant d’être distribués aux laboratoires qui participent au programme.
À l’heure actuelle, FIND fournit un appui financier au programme dans son ensemble et, si nécessaire, une assistance technique à distance aux laboratoires participants. L’OMS organise également des réunions régulières (au moins une fois par an) d’un groupe consultatif qui est chargé d’examiner les procédures du programme et de fournir une expertise technique en vue d’éventuelles modifications des procédures et des principes. De plus, le groupe évalue les résultats d’ensemble du programme, y compris les réclamations, et discute des mesures à prendre pour corriger les principaux problèmes, le cas échéant.
5. Comment s’inscrit-on au programme NAAT EQA de l’OMS ?
Pour se renseigner sur la participation, envoyer un courrier électronique à la personne contact de l’OMS/GMP à MalNAATEQA@who.int. Des appels à participation sont également envoyés aux laboratoires potentiellement intéressés par courrier électronique environ 4 à 8 semaines avant chaque distribution de panels. Une lettre d'accord et un formulaire de profil de laboratoire sont envoyés à l'institution ou l'organisation intéressée.
Le formulaire de profil de laboratoire demande aux participants de fournir des informations de contact et d’expédition (notamment toute exigence particulière, telle que les permis d’importation d’échantillons biologiques) et de décrire la capacité du laboratoire à identifier Plasmodium spp. Ce formulaire rempli et la lettre d’accord (entre le laboratoire participant et l’OMS) doivent être renvoyés à MalNAATEQA@who.int. Une fois que la lettre d'accord a été signée par les deux parties et que le profil du laboratoire est complet, ce dernier est inscrit au programme pour une période illimitée. Le laboratoire recevra alors des coordonnées d’accès pour se connecter au portail web de UK NEQAS consacré au programme NAAT EQA de l’OMS, et sera contacté avant chaque distribution de panels en vue d’organiser les envois.
6. Qu’est-ce qu’un formulaire de profil de laboratoire et pourquoi ces informations sont-elles requises ?
Le formulaire de profil de laboratoire est un questionnaire auquel le laboratoire doit répondre avant de pouvoir s’inscrire au programme NAAT EQA de l’OMS. Son objectif est de préciser les types de diagnostic du paludisme qui seront réalisés sur les panels d’évaluation externe de la qualité au laboratoire, c’est-à-dire les méthodes d’extraction et d’amplification des acides nucléiques qui seront utilisées et, surtout, de déterminer les capacités du laboratoire en termes de résultats diagnostiques, comme la détection de Plasmodium spp. seulement ou l’identification d’autres espèces, notamment P. knowlesi.
Les informations essentielles sont nécessaires pour permettre aux organisateurs du programme de calculer avec précision le score de réussite lorsque les laboratoires envoient les résultats de leurs tests d’évaluation externe de la qualité. Pour s’inscrire au programme NAAT EQA de l’OMS, le laboratoire est tenu de remplir correctement ce formulaire.
7. La participation au programme est-elle payante ?
La participation au programme est actuellement gratuite. Le laboratoire est uniquement responsable des frais associés à la réception des panels (p. ex., les frais de douane, le trajet jusqu'à l'aéroport le plus proche) et aux tests en question.
Toutefois, pour assurer la viabilité à long terme du programme, il est prévu de mettre en œuvre des frais de participation dans un avenir proche pour défrayer au moins une partie des coûts d’exploitation du programme. Ces frais seront déterminés en fonction d'un modèle d'estimation des coûts dédié.
8. Quelle est la composition des panels d’évaluation externe de la qualité ?
Actuellement, les panels comprennent 10 échantillons de sang lyophilisé (SL) et 10 échantillons de taches de sang séché (TSS). Les échantillons palustres présentent différentes densités parasitaires, allant de 50 à 2 000 000 parasites par microlitre de sang (p/ml). Les échantillons positifs contiennent l’une des cinq espèces parasitaires infectant l’homme, à savoir P. falciparum, P. vivax, P. malariae, P. ovale ou P. knowlesi, selon la disponibilité. Les échantillons SL et TSS n’ont pas la même composition, c’est-à-dire qu’ils peuvent inclure différentes espèces et/ou densités de parasites.
9. Comment les panels sont-ils préparés ?
En bref, les parasites sont obtenus soit par culture in vitro de souches de laboratoire – dans le cas de P. falciparum et de P. knowlesi – soit en utilisant des restes de sang provenant d'échantillons cliniques. Le sang exempt de parasites utilisé pour les échantillons témoins négatifs et pour la dilution des parasites est obtenu auprès de banques de sang accréditées et soumis à un dépistage préalable par PCR pour confirmer l'absence de Plasmodium.
Après que les densités des échantillons de parasites cultivés ou cliniques sont déterminées par microscopie spécialisée, les échantillons sont dilués avec du sang exempt de parasites afin d’obtenir des densités parasitaires allant de 50 à 2 000 000 p/ml et sont soigneusement mélangés à chaque étape de la dilution. Pour préparer les échantillons SL, ces dilutions sont ensuite aliquotées en volumes de 500 µl, puis lyophilisées. Pour préparer les échantillons TSS, des volumes de 50 µl sont déposés sur des cartes Protein Saver 903 DBS et séchés à l’air pendant 3 à 4 heures. Tous les échantillons sont stockés à -80 °C pour la conservation à long terme, mais peuvent être expédiés et transportés à température ambiante.
10. Quelle méthode doit-on utiliser pour tester les panels ?
Chaque laboratoire doit tester les panels à l’aide des méthodes d’extraction et d’amplification qu’il utilise couramment pour l’analyse des échantillons cliniques ou de recherche. Les laboratoires ne sont autorisés à envoyer qu'un seul résultat par échantillon. Ils doivent fournir des informations sur les méthodes utilisées, telles que le nom du test ou les détails du kit de test, ainsi que le résultat final dans le formulaire d’envoi des résultats en ligne. Un test ne doit être répété qu'en cas de résultat indéterminé ou d'erreur méthodologique suspectée, comme cela serait le cas pour tout autre échantillon clinique ou de recherche.
11. Que doit-on faire si les scores obtenus sont médiocres ?
Un formulaire de compte rendu d'incident est disponible en ligne sur le site web de UK NEQAS. Les laboratoires qui reçoivent des résultats médiocres doivent remplir ce formulaire et l’envoyer au responsable du programme à parasit@ukneqas.org.uk, mettant en copie la personne contact de l’OMS à MalNAATEQA@who.int. Les laboratoires peuvent également demander qu’un nouveau panel leur soit envoyé pour refaire les tests et effectuer une enquête plus approfondie, en envoyant un courrier électronique aux mêmes adresses. Une assistance technique à distance supplémentaire est actuellement assurée par FIND (jusqu'au 30 juin 2018) et par des membres du groupe consultatif de l'OMS et/ou des représentants des laboratoires d’arbitrage, si leur emploi du temps et leur charge de travail le permettent. Le laboratoire participant peut décider de partager ou non avec ces sources tierces d’assistance technique les résultats d’évaluation externe de la qualité, ainsi que d’autres informations comme les instruments ou réactifs utilisés et les résultats des tests répétés ou de résolution des problèmes obtenus au cours du processus d’enquête.
Le laboratoire participant peut décider de partager ou non avec ces sources tierces d’assistance technique les résultats d’évaluation externe de la qualité, ainsi que d’autres informations comme les instruments ou réactifs utilisés et les résultats des tests répétés ou de résolution des problèmes au cours du processus d’enquête.
Des webinaires seront organisés de temps à autre pour permettre aux laboratoires inscrits de poser des questions à un panel d'experts spécialisés dans le diagnostic moléculaire du paludisme.
En définitive, il incombe au laboratoire d’enquêter et de corriger les problèmes. Les promoteurs du laboratoire doivent envisager d'affecter les ressources appropriées pour améliorer le système de gestion de la qualité du laboratoire, selon les besoins.
12. Les résultats obtenus sont-ils confidentiels ?
Oui. Tous les résultats des tests demeurent strictement confidentiels: seul le laboratoire peut y accéder par l’intermédiaire du portail web de UK NEQAS en utilisant un identifiant et un mot de passe spécifiques. Par ailleurs, seul le personnel de l’équipe organisatrice du programme peut accéder aux résultats individuels dans le but d’analyser les données et de créer des rapports. Seuls des résultats anonymisés et agrégés seront publiés ou communiqués avec le groupe consultatif chargé du programme.
Si des résultats médiocres nécessitent des mesures correctives ou une assistance technique, les organisateurs du programme chercheront d’abord à confirmer l’intérêt et l’accord du laboratoire pour faire appel à des tiers tels que le personnel technique de FIND ou les membres du groupe consultatif. Si le laboratoire accepte, les résultats des tests seront ensuite communiqués pour faciliter la résolution et la correction des problèmes.
13. Peut-on communiquer les résultats à des tiers ?
Chaque laboratoire est libre de communiquer ses résultats de test, en totalité ou en partie, à des tiers sans être tenu d’en informer l’OMS ou UK NEQAS. La communication des résultats est encouragée afin de confirmer le niveau de performance du laboratoire auprès des collaborateurs potentiels, donateurs, autorités de réglementation et autres. La communication de résultats médiocres est également encouragée afin d’obtenir une aide ou un financement pour des ateliers de formation, et pour contribuer à améliorer les performances du laboratoire.
14. Comment obtient-on de l’aide en cas de problème avec la page web ?
Les participants peuvent envoyer un courrier électronique au responsable du programme de UK NEQAS à parasit@ukneqas.org.uk en incluant la description du problème, des captures d’écran et toute autre information utile.
15. Comment obtient-on de l’aide pour améliorer les performances ?
Comme cela est décrit sous la question « Que doit-on faire si les scores obtenus sont médiocres ? », le laboratoire peut demander l’envoi d’un nouveau panel pour refaire les tests et effectuer une enquête plus approfondie sur les causes de ces mauvais résultats. De nouveaux panels peuvent être demandés en contactant le responsable du programme à parasit@ukneqas.org.uk, en mettant en copie la personne contact de l’OMS à MalNAATEQA@who.int. Une assistance technique à distance peut également être fournie par FIND (jusqu'au 30 juin 2018) et/ou par le personnel des laboratoires d'arbitrage du programme et du groupe consultatif de l'OMS, en fonction des disponibilités.
Il incombe néanmoins au laboratoire de s'efforcer d'améliorer ses performances et de corriger les problèmes de qualité. D’autres options doivent donc aussi être envisagées, comme la participation à des ateliers de formation, la collaboration avec des laboratoires partenaires, l’investissement dans l’amélioration du système de gestion de la qualité, etc.
16. Que doit-on faire en cas de chute accidentelle d’un flacon d’échantillon ?
En cas de chute, de dégradation ou de perte d’un échantillon du panel, pour une raison quelconque, le programme peut envoyer de nouveaux échantillons. Pour cela, il suffit au laboratoire de contacter le responsable du programme à parasit@ukneqas.org.uk, mettant en copie la personne contact de l’OMS à MalNAATEQA@who.int, en expliquant le motif de la demande et en précisant combien de flacons de chaque échantillon sont requis. Le programme n’ayant qu’un financement limité, il convient de recourir avec modération et uniquement en cas de réel besoin à cette offre d’envoi de nouveaux échantillons.
17. Le programme NAAT EQA de l’OMS est-il accrédité par l’ISO ?
Le programme NAAT EQA de l’OMS respecte la même norme de qualité que le programme pour la détection moléculaire du paludisme de UK NEQAS. UK NEQAS détient une accréditation de UKAS (United Kingdom Accreditation Service) au titre de la norme ISO 17043: 2010, ce qui signifie que tous les procédés, procédures, infrastructures, personnel, données, documents, etc. de laboratoire sont gérés conformément à des procédures bien définies et en respectant un niveau de qualité élevé tel que défini dans la norme ISO 17043: 2010.