L'examen miscroscopique
L'OMS recommande de diagnostiquer sans retard la maladie au moyen d’un diagnostic parasitologique chez tous les patients dont on suppose qu’ils sont atteints de paludisme, avant d’administrer le traitement. L'examen microscopique optique implique la visualisation de plasmodies dans un frottis en goutte épaisse ou frottis mince du sang du patient.
Types d'examens microscopiques
Les examens microscopiques permettent l'identification de différents parasites à l'origine du paludisme (P. falciparum, P. vivax, P. malariae et P. ovale), leurs différents stades parasitaires, notamment les gamétocytes, et la quantification de la densité parasitaire pour suivre la réponse au traitement. Les examens microscopiques sont la méthode de choix pour enquêter sur les raisons des échecs thérapeutiques. Le Giemsa est la méthode de coloration classique pour les examens microscopiques pour le paludisme, et le diagnostic nécessite l'analyse à la fois d'une goutte épaisse et d'un frottis mince d'un même patient. L'examen microscopique optique est la méthode diagnostique de référence en regard de laquelle les autres méthodes diagnostiques sont habituellement mesurées.
Assurance qualité d'un diagnostic microscopique
Si l'examen microscopique reste la pierre angulaire d'un diagnostic parasitologique du paludisme dans la plupart des grands établissements de soins et hôpitaux, la qualité de l'examen microscopique est souvent insuffisante pour assurer une bonne sensibilité et spécificité du diagnostic du paludisme, perturbant l'issue thérapeutique et l'utilisation optimale des ressources.
Un service d'examen microscopique de niveau acceptable doit être d'un bon rapport coût-efficacité et fournir des résultats d'une exactitude constante et suffisamment rapides pour avoir un impact direct sur le traitement. Cette configuration requiert un programme d'assurance qualité fonctionnel et complet.
Un système de gestion de la qualité efficace pour les examens microscopiques du paludisme requiert:
- un ou des coordinateurs centraux pour superviser l'assurance qualité;
- un groupe de référence (central) de microscopistes à sa tête, appuyé par un programme d'assurance qualité externe, avec une expertise en formation et validation des lames;
- de bons systèmes de formation en place reposant sur les compétences utiles en milieu clinique;
- une formation continue et une évaluation/notation des compétences, appuyées par un ensemble de lames de références validé (banque de lames du paludisme;
- un système de validation des lames pérenne qui détecte les inadéquations majeures avec une bonne communication en retour et un système pour s'attaquer aux performances insuffisantes;
- une bonne supervision à tous les niveaux;
- une bonne gestion des approvisionnements et de l'entretien des microscopes;
- des modes opératoires normalisés à tous les niveaux;
- un budget adapté en tant que part de financement pour la prise en charge des cas de paludisme.
Modes opératoires normalisés pour le diagnostic microscopique du paludisme
Nettoyage et stockage des lames de microscopie
Préparation de la solution mère de Giemsa
Préparation de solution tamponnée à pH 7,2
Préparation de solution (eau) tamponnée à pH 7,2 à partir de comprimés tampons
Contrôle de la qualité de la solution mère de Giemsa et de l'eau tamponnée
Préparation d'une solution de travail Giemsa
Prélèvement de sang par piqûre au doigt et préparation de gouttes épaisses et de frottis minces
Prélèvement d'échantillons sanguins par ponction veineuse et préparation d'étalements de sang à partir de sang veineux collecté dans des tubes contenant un anticoagulant
Étiquetage des étalements de sang à la recherche de plasmodium
Enregistrement et notification des résultats de l'examen
Coloration au Giemsa des étalements de sang à la recherche de plasmodium
Inactivation du virus Ebola lors de la coloration des étalements de sang avec le Giemsa
Examen microscopique des frottis minces et des gouttes épaisses pour l'identification de parasites du paludisme
Numération des parasites
Préparation de taches de sang sur du papier filtre
Procédures générales de sécurité dans le laboratoire de diagnostic microscopique du paludisme
Utilisation, soin d'usage et entretien des microscopes
Management of wastes generated from malaria diagnostic tests
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